ביוטכנולוגיה/שיטת ELISA – בוחן אימונואנזימי על מצע מוצק
מטרה : קביעת ריכוז ובדיקת נוכחות של נוגדן או אנטיגן בתמיסה.
אופן (עקרונות) :
- בדיקה עקיפה.
- מעכב אחר צבע התוצר המתקבל מפעילות האנזים הקשור לנוגדן/אנטיגן שיודע לזהות את אנטיגן/נוגדן המבוקשים - אל הנוגדן/אנטיגן קשור אנזים. הנגדן/אנטיגן נקשרים אל הנוגדנים/אנטיגנים המקובעים למצע.
- פחות מסוכנת מר"א.
הערה: בפעם הראשון עושים את הבדיקה עם נוגדנים/אנטיגנין מסומנים בריכוז ידוע כדי ליצור גרף.
Elisa – בדיקת ריכוז Ab בשיטה התחרותית (גרף יורד)
עריכה
- קישור אנטיגן למצע + חלבון אינרטי.
- מוסיפים תערובת ובה ריכוז של Ab מסומן ודוגמא נבדקת.
- הנוגדנים נקשרים לאנטיגנים המקובעים. בין הנוגדנים (מהדוגמא והמסומנים) יש תחרות על הקישור עם האנטיגן.
- שטיפה.
- הוספת סובסטרט (לבדיקת הפעילות האנזימטית) – האנזים קשור אל הנוגדנים/אנטיגנים המסומנים. הוא פועל על הסובטרט וכך נוצר צבע.
הערות :
- ככל שהגרף יותר גבוהה (כך יש יותר נוגדים הקשורים לאנטיגנים).
- זו היא הבדיקה המקובלת לקביעת ריכוז נוגדני אדמת בזמן הריון.
Elisa בדיקת ריכוז אנטיגנים בשיטה התחרותית (גרף יורד)
עריכה
- קישור אנטיגן למצע + חלבון אינרטי
- הוספת אנטיגנים מהדוגמא הנבדקת (משולשים חופשיים) והוספת נוגדן אנזימי מסומן בר"א.
- ישנה תחרות בין האנטיגנים החופשיים למקובעים + שטיפה.
- הוספת סובסטרט (הוא היוצר צבע ונקשר לאנטיגן המסומן).
Elisa בדיקת ריכוז Ab בשיטה הלא תחרותית (גרף עולה)
עריכה
- קישור אנטיגן למצע + חלבון אינרטי.
- הוספת הדוגמא הנבדקת ( ) וקשירת לאנטיגנים.
- הוספת נוגדן שניוני ( ) כנגד FC של נוגדן.
- קישור לנוגדן הקשור למצע + שטיפה.
- הוספת סובסטרט הנקשר לנוגדן השניוני ויוצר צבע
Elisa בדיקת ריכוז אנטיגנים בשיטה הלא תחרותית (גרף עולה)
עריכה
- קישור Ab לצלחת הבדיקה + חלבון אינרטי + שטיפה.
- הוספת אנטיגנים מהדוגמא הנבדקת (מעוין) שאת ריכוזם ברצוננו לדעת (ככל שיותר אנטיגנים יקשרו, כך כמותם גדולה יותר) .
- הוספת נוגדן מסומן כנגד האנטיגנים + שטיפה
- בדיקת בליעה.
