ביוטכנולוגיה/תספיג אימונולוגי (Immunoblotting)

ידועה גם בשם : הספג מערבי (Western Blot)

עקרונות השיטהעריכה

פרק זה לוקה בחסר. אתם מוזמנים לתרום לוויקיספר ולהשלים אותו. ראו פירוט בדף השיחה.



שלבי השיטהעריכה

 
השלבים :
שלב A : הרצת חלבון בג'ל.
שלב B : הספגה + שלבים נוספים
שלב C: קבלת תוצאות

מטרה : בדיקת נוכחת של חלבון לו קיים נוגדן.

השיטה :

  1. בתוך תערובת מצויי אנטיגן (חלבון) אותו אנו רוצים למצוא.
  2. הרצה בתוך חלבון ג'ל את מרכיבי התערובת.
  3. הספגה = העברה לממבראנת (נייר) ניטרוצלולוז.
  4. הוספת חלבון אינרטי (בדרך כלל חלב) לחסימת אתרים פנויים בממבראנה.
  5. הוספת נוגדן ראשוני (1stAb) הנקשר לאנטיגן המבוקש.
  6. הוספת נוגדן שניוני (2stAb) מסומן אנזימטית + סובסטרט (יוצר צבע), הנקשר אל הנוגדן הראשוני. בעקבות ההיקשרות נוצר תוצר בלתי מסיס. הנוגדנים השניונים מסומנים בר"א מבצעים אוטורדיוגרפיה.
  7. פסי הצבע של התוצר מעיד על מיקום האנטיגן (במקרה שלנו ב-A ו-D).

יתרונות וחסרונות לעומת שיטת ELISAעריכה

פרק זה לוקה בחסר. אתם מוזמנים לתרום לוויקיספר ולהשלים אותו. ראו פירוט בדף השיחה.